咀嚼压力增强对大鼠牙周膜IL-1β表达影响的研究

　　【摘要】　目的　检测咀嚼压力在正常及增强状态下，大鼠牙周膜成纤维细胞(PLF)IL-1β的动态表达，探讨IL-1β在牙周膜改建中的分子机理。方法　采用HE染色和免疫组化的方法，观察牙周膜形态变化以及PLF中IL-1β蛋白表达。结果　咀嚼压力增强引起牙周膜结构致密、宽度增加。同时，PLF中IL-1β表达较正常时增强。结论　咀嚼压力增强，促使IL-1β明显增多。本实验从分子水平探讨了牙周膜改建的机理，揭示了牙周膜结构与功能在改建中的一致性。

　　【关键词】咀嚼压力　　白细胞介素-1β　　牙周膜改建　　免疫组化

　　白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)是一种具有多种生物学活性的细胞因子，大量体外实验证实，机械力作用于牙周膜成纤维细胞(PLF)能产生IL-1β和PGE2［1］，IL-1β又能作用于PLF，促进其DNA的合成和细胞的生长，参与牙周膜的代谢。本实验对咀嚼压力增强对牙周膜IL-1β表达的影响以及与牙周膜改建的关系进行研究。

材料和方法

　　1.动物模型：选用80只250g±20g成年雄性Wistar大鼠，随机等量地分为对照组(正常咀嚼压力)和实验组。实验组拔除左侧上颌(B区)所有磨牙。这样，实验组动物的D区磨牙因丧失对颌牙导致咀嚼压力丧失，而C区磨牙功能代偿性增强则构成咀嚼压力增强的动物模型。两组动物分别在实验后6小时、1天、2天、3天、1周、2周、3周和4周各处死5只，共16组。

　　2.组织标本制备：实验动物采用4%多聚甲醛心内灌注行内固定。取出下颌相应骨段，保留磨牙区，置于4%多聚甲醛中巩固固定6小时。将标本移至EDTA中脱钙2周。梯度乙醇脱水，石蜡包埋。标本厚5μm，裱于经硅化处理的玻片上。

　　3.实验方法：①组织形态学：取相应切片进行苏木素-伊红(HE)染色，在光学显微镜下观察牙周膜形态变化，并用显微标尺对牙周膜宽度进行测量。②免疫组化：IL-1β单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)。ABC试剂盒(美国Vector公司)。常规免疫组化染色，DAB显色。设已知有IL-1β表达的应激大鼠脾组织作阳性对照，以封闭血清代替一抗作阴性对照。

　　4.图像分析与统计学处理：采用MIAS-2000型图像分析仪，对实验组和对照组各时间点牙周膜染色强度进行测量。每个标本均选第一磨牙牙根为观察对象。结果用t检验进行统计学分析。

结　　果

　　1.组织形态学：①对照组(正常咀嚼压力)大鼠牙周膜结构致密，纤维排列有序，成纤维细胞胞核的方向与之一致。②实验组(咀嚼压力增强)2周时牙周膜宽度明显增加，牙周膜结构致密，其纤维、细胞排列有序(表1)。3周、4周时与之基本相似。

　　　　　表1　实验组和对照组不同实验时间

　　　　　牙周膜宽度差值表(单位：10-2mm)

 

对照组

(正常)实验组(增强)1周2周3周4周近中侧9.1±1.19.6±0.911.0±1.0*11.6±1.0*11.9±1.1*远中侧7.9±0.68.0±0.89.1±0.8*9.5±1.0*9.9±0.9*　　*表示P＜0.05，有显著性差异。

　　2.免疫组化：①对照组大鼠牙周膜成纤维细胞(PLF)能稳定表达IL-1β，其免疫阳性信号位于胞浆内，表达强弱在各时间点无明显变化，无一定规律。②实验组牙周膜表达IL-1β阳性强度均明显高于对照组(表2)。表达有一定的时间规律：1天后出现较明显的变化，随后阳性染色强度逐渐增大，2周达高峰，然后逐渐减小，4周时基本恢复正常。

表2　对照组和实验组不同实验时间牙周膜IL-1β

免疫组化染色灰度差值表

　　**表示P＜0.01，*表示P＜0.05，二者均有显著性差异。无星号者，P＞0.05，无显著性差异