固齿健周煎剂对老年小鼠的抗氧化作用
【摘要】 目的 探讨中药固齿健周煎剂对老年小鼠的抗氧化作用。方法 实验组为固齿健周煎剂灌胃的老年小鼠，对照组为灌胃等量自来水的青、老年小鼠。检测过氧化脂质、超氧化物歧化酶及过氧化氢酶。结果 实验组与青、老年小鼠对照组比较差异均有显著性。结论 固齿健周煎剂具有抗脂质过氧化的作用，可能对调节机体代谢功能、抗自由基损伤及恢复牙周组织健康有益。
【关键词】 固齿健周煎剂 牙周病学 抗氧化药牙周炎是口腔常见病、多发病，发病因素复杂。现多认为牙周炎是由菌斑感染引起的非特异性炎症。直接损伤、防御反应引起的牙周组织继发性损害及一系列免疫反应均可造成牙周炎。自由基是机体氧化过程中产生的中间代谢产物，是损害机体自身的毒性产物。自由基已被证实为多种疾病的致病因子，它可导致炎症反应、加速衰老、造成局部或全身组织损伤。我们对复方固齿健周中药煎剂对老年小鼠的抗氧化作用进行了初步探讨。
材料与方法
1.材料：
(1)动物与分组：实验动物为21～25只C57BL/6雌性小鼠，由北京医科大学实验动物部提供。分为对照组：8只青年小鼠(3个月鼠龄)及7～8只老年小鼠(19个月鼠龄)；实验组：7～9只老年小鼠。
(2)药物：150 g/L的固齿健周煎剂(由北京医科大学口腔医学院中医粘膜科提供)，其主要成份为骨碎补、熟地黄、旱莲草、鸡血、补骨脂、续断、黄柏、知母等。实验组灌胃每次给药0.65 ml/只，2次/天，共给药3周；对照组同法灌胃等量自来水。
(3)试剂：①Hank 液，用前加5% NBS及青链霉素各105U；②完全RPMI-1640培养液(含10% NBS及青链霉素各105U，L-Glutamine 200 mmol/L、5×10-52-ME)；③Cona (Sigma, 批号81039)；④LPS(Sigma产品)；⑤消炎痛(北京医科大学药厂提供)；⑥二氧化硅(超声粉碎，颗粒<5μm,由北京医科大学免疫研究室提供)；⑦闪烁液(PPO 2.5g, POPOP 0.25g加入500 ml二甲苯钠溶解)；⑧3H-TdR(上海原子能研究所生产)。
2.方法：
(1)肝脑组织过氧化脂质(lipid peroxide,LPO)含量的测定：摘除小鼠眼球取血，肝素抗凝。断头取脑，开腹腔取肝脏，经冷生理盐水冲洗后制成10% 组织匀浆置冰水中备用。用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定。将肝、脑组织匀浆各0.5ml分别加到5.5 ml TBA液中，混匀沸浴30 min；迅速冷却后离心10 min，用751分光光度计测量上清液的A值(532 nm)，计算LPO的相对含量(nmol/g)。
(2)红细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)测定：采用改进H，P.Misra法。先摘除小鼠眼球取血，1%肝素抗凝。用0.05 mol/L Tris生理盐水(pH 7.4)洗细胞3次，取压积为0.3 ml的红细胞加等量双蒸水溶解，取20 μl加入5 ml Hicv液中，测血红蛋白含量(540 nm) AHb，其余稀释液加冷乙醇-氯仿0.42 ml，冰水振荡1 min，加双蒸水0.16 ml混匀，离心5 min。取上清液50 μl加到2 ml 6×10-4 mol/L联大茴香胺和2 ml 3.9×10-5 mol/L核黄素的混合液中，混匀后40 W日光灯照射8 min，用751分光光度计比色测ASOD(460 nm)，查标准曲线，结果以μmol/g Hb表示。
(3)血过氧化氢酶(catalase, CAT)活性测定：采用过硼酸钠滴定法。用双蒸水制成1∶100溶血液为样品，50 ml三角烧瓶内放入1 ml PB缓冲液(0.05 mol/L, pH=7.6)及3 ml NaBO3(0.1 mol/L)液。室温下放置5～10 min后，加入待测样品0.5 ml，计时并轻轻摇动。反应2 min后加1 mol/L H2SO4 3 ml 终止反应。再用0.1 mol/L KMnO4滴定，直至玫瑰色不消失为止。记录所用KMnO4量(A值)；同时滴定空白管(0.5 ml双蒸水)，记录所耗KMnO4量(Ao值)，结果用活性单位U表示(U=Ao-A/t)。结果
1.肝脑组织LPO含量测定结果：老年小鼠对照组LPO含量明显增高，而实验组则明显降低，并接近青年小鼠对照组的水平。见表1。
2.红细胞SOD检测结果：老年小鼠对照组的红细胞SOD值明显降低，而实验组的SOD值则明显增高，并接近青年小鼠对照组的水平。见表2。