单纯疱疹病毒I型在RAU发生中的作用探讨

提要　本研究采用PCR技术分别对42例RAU患者、28例OLP患者和30例正常人口腔脱落细胞中HSV-1 DNA进行检测，结果显示：RAU组HSV-1 DNA阳性率42.86％，与OLP病例对照组7.14％及正常对照组6.67％比较，均有显著性差异（P＜0.005）；不同性别、年龄、型别的RAU患者口腔脱落细胞HSV-1 DNA的阳性率无显著性差异（P＞0.05）。提示HSV-1在RAU发生中具有重要作用。

　　关键词　RAU　　HSV-1　　PCR

材料与方法

　　病例选择：RAU患者、病例对照组OLP患者均为湖北医科大学附属口腔医学院和第二附属医院粘膜专科门诊确诊病例。RAU组42例，男性19例、女23例；其中轻型31例，重型11例，年龄13～62岁（平均32.6岁）。OLP组及NOM组分别为28例、30例，其年龄、性别与RAU组相匹配。

　　引物设计：参照相关文献，由中科院上海细胞生物研究所合成〔1、2〕。

　　Primer-1： 5-ACGACGACGTCCGACGGCGA-3′

　　Primer-2： 5′-GTGCTGCTGCTGGACGACAC-3′

　　DNA提取：饱和酚／氯仿法提取脱落细胞DNA。

　　PCR反应：体系总体积为50μl，包括Primer-1 2μl(0.5μm),Primer-2 2μll(0.5μm),dNTPs 6μl(200μM),Taq酶2μl(2u),10xBuffer 8μl，模板DNA 10μl，灭菌ddH2O 20μl。94℃变性5min后，进入35个循环：94℃，45S;65℃，45S；72℃，45S。最后72℃延伸5min。扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳，在紫外透射反射分析仪上观测结果，参照DNA Marker，以278bp处出现特异性亮带者为阳性。

结　果

　　1. PCR检测HSV-1 DNA的特异性。本研究以DNAMarker为参照，以灭菌ddHO为阴性对照，分别对HSV-1，HSV-2，CMV DNA进行PCR扩增，结果显示仅有HSV-1在278bp处出现特异性DNA带。

　　2. RAU组与正常对照组口腔脱落细胞HSV-1 DNA的检测比较。对42例RAU患者脱落细胞进行HSV-1 DNA检测，18例出现特异性DNA带，阳性率为42.86％；正常对照组28例中仅2例HSV-1 DNA阳性，阳性率为6.67％；两者比较差别有高度显著性（P＜0.005）。

　　3. RAU组与OLP病例对照组脱落细胞HSV-1 DNA的检测比较。OLP组28例，糜烂型14例，斑纹型14例，其年龄、性别、取材部位均与RAU组相匹配。28例OLP中2例阳性，阳性率为7.14％，与RAU组比较，有高度显著性差异（P＜0.005）。

　　4. 不同年龄组RAU患者HSV-1 DNA的检测比较。20～40岁组RAU患者21例，HSV-1 DNA阳性率为47.62％（10／21）；其余＜20岁和＞40岁组21例，阳性率为38.10％（8／21），两者比较无显著性差异（P＞0.05）。

　　5. 不同性别RAU患者HSV-1 DNA的检测比较。男性RAU患者19例，HSV-1 DNA阳性率为36.84％（7／19）；女性患者23例，阳性率为47.83%（11／23），两者比较无显著性差异（P＞0.05）。

　　6. 不同型别RAU患者口腔脱落细胞HSV-1 DNA的检测比较。42例RAU患者中，轻型31例，HSV-1 DNA阳性16例，阳性率为51.63％；重型11例，2例阳性，阳性率为22.22％，两者相比无显著性差异（P＞0.05）。

讨　论

　　单纯疱疹病毒I型（HSV-1）在人群中感染极为广泛，因其感染的长期潜伏性和反复发作倾向符合RAU临床特点，是RAU的主要病因病毒之一。随着分子生物学技术在病毒检测中的应用，分别在疱疹性口腔溃疡（疱疹性口炎）、AIDS相关性口腔溃疡及白塞病（Behcet′s Disease,BD）口腔溃疡中检出了HSV-1 DNA〔3、4、5〕而在RAU溃疡局部HSV-1 DNA的检测研究中，仅见Studd等PCR检测11例RAU患者，结果2例阳性〔6〕。

　　本研究中对42例RAU患者口腔脱落细胞PCR检测HSV-1 DNA，阳性率为42.86％；28例正常组健康人和30例OLP病例对照组患者口腔粘膜脱落细胞的HSV-1 DNA阳性率分别为6.67％、7.14％，与RAU组比较，均有高度显著性差异（P＜0.005），为HSV-1在RAU患者溃疡局部的感染提供了直接证据，提示了HSV-1在RAU发生中的重要作用。

　　RAU多见于青壮年，且女性多于男性。本研究对42例RAU患者进行性别和年龄分组对照比较，女性阳性率47.83％，与男性的36.84％比较，差异无显著性（P＞0.05）；将20～40岁分为一组，＜20岁和＞40岁并为一组，其阳性率分别为47.62％、38.10％，两组间无显著性差异（P＞0.05）。说明年龄、性别差异未对HSV-1感染RAU患者产生明显影响。