口腔念珠菌白斑中CD44H、CD44v3和CD44v6的异常表达

　　【摘要】　目的　研究口腔念珠菌白斑(oral candidal leukoplakia,OCL)上皮中CD44H、CD44v3和CD44v6的表达特点及其与炎症、癌变的关系。方法　用免疫组织化学方法对29例OCL上皮中CD44H、CD44v3和CD44v6的表达进行研究。结果　OCL单纯增生、轻度异常增生上皮有CD44H、CD44v3和CD44v6的强阳性表达；重度异常增生上皮全部出现低表达，与对照组非白念白斑一致；形成微脓肿或炎症密集区的上皮出现低表达。结论　口腔念珠菌白斑伴上皮重度异常增生者CD44H、CD44v3及CD44v6表达下降，可能与癌变有关；炎症明显区域CD44H、CD44v3及CD44v6出现低表达及细胞间粘附力下降。

　　CD44是存在于多种细胞表面的整合膜蛋白，是一种多功能性跨膜透明质酸受体，在细胞-细胞、细胞-基质之间的粘连及淋巴细胞的成熟和归巢过程中起重要作用，且与肿瘤的转移行为密切相关。人CD44基因位于11号染色体短臂上，至少有20个外显子［1，2］。标准型或血液型CD44(CD44H/CD44s)蛋白分子量为90KD，由外显子1～5和16～20编码。在CD44H序列中插入额外的外显子，则形成CD44变异型(CD44v)，这些外显子至少有10个(外显子6～15)，现已发现至少9种CD44的变异型。有研究表明CD44在很多肿瘤中的异常表达可能与肿瘤的浸润、转移有关［3］，但在口腔鳞状细胞癌中表达的报道却不一致［4，5］。

　　口腔念珠菌白斑(oral candidal leukoplakia,OCL)又称慢性增殖性念珠菌病。临床表现为口腔粘膜上的白色斑块，组织学检查可见上皮增生、上皮内炎症细胞游出或微脓肿形成，PAS染色可见上皮内有念珠菌菌丝侵入［6］。许多学者研究发现OCL中上皮细胞增殖活跃，并出现较高比例的上皮异常增生和癌变。因此，有人提出了OCL为癌前病变的观点，但目前对此仍有争论［7～9］。本研究选择29例OCL和35例LK，进行常规免疫组织化学染色，分别对两组病变上皮中CD44H、CD44v3和CD44v6的异常表达进行观察，以进一步探讨OCL的性质及CD44H、CD44v3和CD44v6的异常表达在上皮异常增生和癌变中的作用。

材料和方法

　　选择29例1986～1995年存档蜡块标本，经PAS染色证实上皮内有白色念珠菌菌丝侵入，确诊为OCL的作为实验组。另随机选取此期间诊断的35例普通口腔白斑，作为对照组，均经PAS染色证实上皮无菌丝侵入。因为上述部分病例中既有单纯增生又有异常增生，所以本实验共获取OCL单纯增生16例，轻、重度异常增生各为8例、6例；LK单纯增生21例，轻、重度异常增生各为6例、11例。

　　上述标本经常规方法制成5μm厚的石蜡切片，经脱蜡、封闭内源性过氧化物酶后，放入有柠檬酸盐缓冲液的容器内，微波炉加热20分钟以充分暴露抗原，冷却后滴加CD44H、CD44v3和CD44v6的单克隆抗体(稀释度为1：100)，室温下孵育60分钟；滴加生物素标记的第二抗体(1：200)，室温下孵育30分钟；滴加酶联链亲合素(1：200)，室温下孵育30分钟。以上各步骤之间均用Tris缓冲液洗3次。DAB显色5分钟，苏木素复染、脱水、透明后封片。在光镜下观察阳性染色在两组病变上皮中的分布和染色强度。阴性对照组省略第一抗体，以Tris液代替。本实验所用药品均为Santa Cruz公司出品。

结　　果

　　两组病变的CD44H、CD44v3和CD44v6染色均为阳性，上皮细胞膜呈均一的黄褐色网状染色。阴性对照切片未见阳性染色。三种抗体的染色特点基本一致，不同的是CD44H染色在淋巴细胞胞膜也表达阳性，而CD44v3染色见血管平滑肌阳性，CD44v6则仅表达上皮阳性。

　　16例OCL单纯增生上皮CD44H、CD44v3和CD44v6染色呈强阳性表达的有14例。阳性染色见于除角化层以外的所有上皮细胞膜，但基底细胞靠近基底膜的一面未见染色(图1)。2例出现低表达(即染色强度和/或范围明显降低)，表现为基底细胞及邻近棘细胞染色变浅或消失。8例OCL轻度异常增生上皮中有2例出现低表达(25%)，且随增生程度的加重，低表达表现得更明显(表1，图2)，重度异常增生的低表达数与单纯增生相比具有统计学意义(P＜0.005)。由表1、2可见，OCL在单纯增生，轻、重度异常增生上皮中CD44H、CD44v3和CD44v6的表达特点，与对照组LK的表达基本一致，两者之间不具有差异性。