复发性阿弗他溃疡患者淋巴细胞抑制功能的改变

　　【摘要】　目的　探索复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer, RAU)患者T淋巴细胞的抑制功能。方法　应用刀豆碱(concanavalin A, ConA)激活产生的淋巴细胞抑制检测法探查了12例溃疡期患者外周血淋巴细胞的抑制活性。结果　患者溃疡期的T淋巴细胞抑制率在ConA为1、2、4和8mg/L时，分别是60%、40%、27%和20%，明显低于正常组的72%、56%、41%和34%(P<0.05)。结论　RAU患者外周血T淋巴细胞的抑制功能可能出现暂时性降低。

　　【关键词】　T淋巴细胞　　抑制因子，免疫　　复发性阿弗他溃疡

　　复发性阿弗他溃疡(recurrent apthous ulcer, RAU)的病因目前仍不十分清楚，但大量的研究结果表明T淋巴细胞亚群平衡失调(细胞数量平衡或/和功能平衡失调)可能是其重要的致病因素［1～3］。这些研究提供了以下依据：①RAU患者淋巴细胞亚群中，CD8+(T8+)细胞增多，CD4+(T4+)细胞减少，CD4+/CD8+比例下降；②在CD4+细胞亚群中，CD4+，CD45RA-(T辅助诱导细胞)增多，CD4+，CD45RA+(T辅助诱导细胞)减少；③RAU患者淋巴细胞对促有丝分裂剂——植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)和刀豆碱(concanavalin A,ConA)的增殖反应降低［4］。这提示RAU患者T淋巴细胞的抑制功能可能降低。这一点已在口腔扁平苔藓、慢性感染性肠炎和某些自身免疫性疾病中得到证实［5］。我们运用自身淋巴细胞混合反应探索RAU患者T淋巴细胞的抑制功能。

材料和方法

　　1.临床资料：12例经临床确诊的溃疡期RAU患者，男性7例，女性5例；年龄20～60岁，平均23.0±3.4岁。以15例健康人作为对照组，其中男性9例，女性6例；年龄20～47岁，平均31.6±4.7岁。两组年龄差异无显著性(P>0.05)。

　　2.淋巴细胞的提取：每位受试者于实验当天上午8时30分取静脉血40ml，注入含肝素防凝管。运用Ficoll-Paque(Pharmacia, Uppsala, Sweden)梯度离心。所提取的淋巴细胞用RPMI-1640(Commonwealth Serum Labratories, Melbourne, Australia)洗涤2次，此时生活细胞在95%以上。用标准培养基将细胞浓度调至1010/L。培养基的组成是RPMI-1640，10%热灭活的人类AB血清(Red Cross Blood Band, Brisbane, Australia)，5×104IU/L青霉素G，50mg/L链霉素(CSL，Melbourne,Australia)和2mmol/L谷酰氨(Sihma,STL ouis, MO)。

　　3.诱导期：用与Sugerman等［5］同样的方法将细胞悬浮液分为3部份：①激活的效应细胞群(AE25)。②非激活的效应细胞群(NE)。③反应细胞群(SR)。AE25和NE置CO2培养箱48小时。SR于4℃时保存48小时。

　　4.反应期：AE25、NE和SR于48小时后进行4种自身细胞混合反应：①SR用RPMI-1640洗脱1次后，调至2×109细胞/L。②AE25和NE用含α-右旋糖苷的RPMI-1640洗脱2次后调至2×109细胞/L，并用60Co照射，抑制其增殖能力。③4种自身细胞混合反应如下：A:50μlSR+50μlAE25+100μlConA；B:50μlSR+50μlAE25+100μlTCM；C:50μlSR+50μlNE+100μlConA；D:50μlSR+50μlNE+100μlTCM。其中TCM为淋巴细胞培养液，所有反应均在96孔培养皿中进行，培养皿置37℃、5%CO2的培养箱中4天。

　　5.收获期：①培养的第3天，所有培养皿孔内加入3H(胸腺核苷)。②培养结束后，用细胞收获器(Titertek cell Harvester 530)将细胞收获于玻璃纤维纸上。③β-闪烁计数仪计数(β-emission counter)。

　　6.抑制活性的计算：不同ConA浓度下的抑制活性百分率用以下公式计算：抑制率(%)=(1-×100%，将对照组与实验组不同ConA浓度时的抑制率做显著性u检验。

结果

　　将抑制率分为溃疡期组和对照组。如附图所示，两组的抑制率在ConA浓度为1、2、4、8mg/L时，差异有显著性(P<0.05)。由于ConA浓度升到16、32mg/L时出现负抑制，故未做显著性检验。

 

附图　溃疡期组和对照组在不同ConA浓度时抑制率的比较