FcγR基因型与早发性牙周炎易感性的研究
【摘要】 目的 探讨FcγR基因多态性与早发性牙周炎（early-onset periodontitis ，EOP）易感性的关系。方法 提取33例EOP和27名健康对照者的静脉血白细胞DNA，分别用PCR+BstUI酶切和PCR+测序检测FcγRIIA和FcγRIIIB的基因型，比较各基因型检出率的差别。结果 FcγRIIA基因型在两组间的分布无差别，FcγRIIIB NA1/NA1的检出率高于健康对照组。结论 FcγRIIIB NA1/NA1基因型可能是EOP的遗传易感因素。
Relevance of FcγR polymorphism to the susceptibility of early-onset periodontitis
FU Yali*, CAO Caifang, WANG Shenwu.
*School of Stomatology, Beijing Medical University, Beijing 100081
【Abstract】 Objective To investigate the polymorphism of the FcγR genotype and its association with the susceptibility of early-onset periodontitis (EOP).Methods DNA of the white blood cells from 33 subjects with EOP and 27 healthy controls was extracted. Genotypes of the FcγRIIA and FcγRIIIB were determined by PCR followed by BstUI restriction endonuclease digestion and DNA sequencing, respectively. Then compared the differences in distribution of each genotype.Results No statistical difference in distribution of FcγRIIA was observed between patients and controls. However, a significant over-representation of the FcγRIIIB NA1/NA1 was found in EOP.Conclusion These results suggest that the FcγRIIIB NA1/NA1 may be a risk indicator for the susceptibility of the EOP.
【Key words】 Periodontitis Receptors，IgG Genotype Disease susceptibility
Fcγ受体（FcγR）是IgG Fc段受体，主要表达于免疫细胞膜上，在特异性抗体和效应细胞功能间象桥梁一样使体液免疫和细胞免疫紧密关联。FcγR分为FcγRI、FcγRII和FcγRIII 3类，其中FcγRII-A和FcγRIII-B都存在等位基因的多态性，FcγRIIA-R131和FcγRIIIB-NA2基因型与低亲和力的受体相关。Sanders等［1］报道FcγRII-R131基因与儿童复发性细菌性呼吸道感染的易感性相关；研究表明早发性牙周炎（early-onset periodontitis ，EOP）患者多有细胞免疫和体液免疫的缺陷［2］；还有人报道EOP具有家族聚集性［3］。为探讨FcγR基因多态性与EOP易感性的关系，我们做了如下研究。
材料和方法
1. 研究对象：33例EOP患者选自北京医科大学口腔医学院牙周科门诊，年龄15～35岁，平均26.5岁，男18例，女15例。入选的患者均符合：全身无系统性疾病，1年内未做过牙周系统治疗，3个月内未服用抗生素，妇女未妊娠。EOP的诊断标准参照Novak MJ 和Novak KF的方法［4］，同时排除口腔正畸治疗史、明显的咬合创伤、错畸形及其他明显的局部刺激因素。另从本院学生和职工中选择年龄和性别尽量相配的27名牙周健康者，年龄14.5～34岁，平均24.7岁，男15例，女12例。全身健康，除牙齿颊面外，均无附着丧失，菌斑指数≤1, 出血指数（bleeding index，BI）≥2的位点不超过10%，全口平均BI≥1.05。
2. 样本收集：抽取前臂静脉血，EDTA抗凝，快提法提取外周血白细胞DNA［5］，即在0.5 ml抗凝血中加入等体积的裂解缓冲液，13 000转离心20秒，弃上清液，再加入1 ml裂解缓冲液，再次离心，弃上清液，沉淀中加入0.5 ml PCR缓冲液，10 g/L蛋白酶K 3 μl，55℃水浴1小时，再以95℃水浴10分钟灭活蛋白酶K后，置－70℃贮存待检。
3. 检测FcγRIIA基因型：采用PCR扩增FcγRIIA，然后用酶切法鉴定其基因型。PCR上游引物序列为5′-GGA AAA TCC CAG AAA TTC TCG C-3′，下游引物序列为5′-CAA CAG CCT GAC TAC CTA TTA CGC GGG-3′（由GIBCO公司合成）。使用PE480 PCR仪。50 μl PCR反应体系包括10 μl基因组DNA模板，引物各20 pmol， 10×PCR反应缓冲液（无MgCl2）5 μl， 2.0 mmol/L MgCl2和2U Taq DNA聚合酶；30个PCR循环（96℃ 30秒，55℃ 30秒，72℃ 40秒）。扩增产物为366 bp,其中含有3′区引入的BstUI酶切位点和5′区依赖于基因多态性的潜在BstUI酶切位点，18 μl PCR产物加入20 U BstUI于37 ℃酶切过夜，酶切产物经8% PAGE电泳检测［6］。
