RAU患者外周血NK细胞活性的测定

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　　提　要　目的　初步探讨复发性阿弗他溃疡（recurrent aphthous ulcer,RAU）患者外周血自然杀伤细胞（NK细胞）活性与RAU发病的关联性。方法　应用乳酸脱氢酶（LDH）法对22例RAU患者在发病时和不发病时的外周血NK细胞活性进行测定，并与11例无RAU病史的健康者的NK细胞活性对照。结果　RAU患者在发病时NK细胞活性是20.20±13.58％，不发病时17.92±13.68％，而健康人对照组NK细胞活性是16.45±6.53％，三组各自配对，统计学显示NK细胞活性无明显差别，（P＞0.05）。结论　RAU患者发病时和不发病时外周血NK细胞活性与健康人群NK细胞差异在统计学上无显著意义，提示RAU的发生与外周血NK细胞活性可能无直接关联。

　　关键词　复发性阿弗他溃疡　　NK细胞　　外周血活性测定

材料和方法

　　检测对象：RAU的诊断以新版高等教材为标准，患者均为轻型RAU，患病时间为0.5～14年，所有RAU患者在采血前未经任何治疗，未服免疫抑制剂药物，无其它口腔疾患，身心健康。健康对照组者是自愿的，无系统性的免疫性疾病的常人（表1）。

表1　一般临床资料

组　　别例 数性别（M／F）年　　龄RAU患者227／1540.18±14.12健康对照组119／230.00±14.15　　NK细胞活性检测：NK细胞活性检测采用乳酸脱氢酶（LDH）法〔1，2〕，每个病人和对照组都在上午7时30分至8时30分获取静脉血4～5毫升，以肝素抗凝，经梯度离心取外周血单个核细胞（PBMNC）洗2～3次，调细胞浓度为4×106／ml备用，此细胞为效应细胞，分别在有RAU病史患者发病时与不发病时，健康人对照组取样测定。

　　靶细胞K562经18～22小时培养后，取出洗2～3次，调细胞浓度为2×106/ml备用，加样，试阴、阳对照，将效细胞靶细胞混合成一定比例后，37℃孵育2小时，再离心取上清，在32℃环境中，用分光光度计测340nm波长的光密度，然后用公式换算成NK细胞杀伤率。

　　

　　结果见表2。

表2三组外周血NK细胞活性结果比较

a组与b组，b组与c组及a组与c组的P值分别都大于0.05。

　　①RAU患者外周血NK细胞活性发病时为20.20±13.58％。②RAU患者外周血NK细胞活性不发病时为17.92±13.68％。③健康对照组外周血NK细胞活性为16.45±6.53％。统计学处理，两组作t检验，三组间作配对t检验，RAU患者外周血NK细胞活性在发病时、不发病时，并与健康对照组比较，无显著性差异,（P＞0.05）。

讨　　论

　　1. RAU是一种多因素口腔粘膜病，多个研究报告RAU患者机体免疫功能异常，循环免疫复合物（CIC）增多，T细胞数目／功能下降，表现为体液免疫亢进，细胞免疫降低〔3，4，5〕。NK细胞是否参与RAU的发生，已引起有关学者的关注，国外有学者研究发现RAU患者的发生与外周血NK细胞活性无关〔6〕，但不少研究并不能证实NK细胞与RAU发生有直接联系〔7，8〕。本研究通过LDH法检测RAU患者外周血NK细胞活性，发现RAU病人发病时和不发病时NK细胞活性与正常健康人对比，无显著性差异（P＞0.05）。结果与Pedersen研究结果一致〔6〕。

　　2. NK细胞是重要的淋巴细胞亚群，无细胞粘附性，无吞噬力，是一群异质性多功能的免疫细胞，能释放细胞因子，杀伤突变或受病毒感染的靶细胞，而且具有生理性免疫调节作用。Nabel等认为NK细胞对抗体生成的调节是通过直接杀伤B细胞而实现的〔9〕。也有学者认为NK细胞对B细胞的这种抑制作用可能是通过辅助细胞（A细胞）起作用的，NK细胞可能作用于A细胞表面的某一靶结构—转铁蛋白受体（TFR），干扰其对抗原的递呈作用，从而间接地抑制B细胞的活性。Scala等研究发现，NK细胞对T细胞也有重要的调节作用，在T细胞增殖反应中起辅助细胞的作用。表明NK细胞对体液免疫起抑制作用，提高细胞免疫作用。而RAU发病的免疫不平衡，则为体液免疫亢进，细胞免疫降低，本研究中，RAU发病时，不发病时和健康人对照组的NK细胞活性无显著差异,提示NK细胞可能不参与RAU的免疫系统调节：体液免疫与细胞免疫改变导致RAU的过程与NK细胞无关。