人类高分子量唾液粘蛋白抗釉质脱矿的研究

［摘要］　目的：观察高分子量唾液粘蛋白(MG1)是否具有抗釉质脱矿 作用。方法：以全唾液、腮腺唾液、颌下/舌下腺唾液和纯化的MG1对实验 牙釉质表面进行体外孵育以形成唾液获得性膜，观察此膜抗釉质脱矿作用。结果： 全唾液组和腮腺唾液组只有39.7%和21.2%的最大保护百分度，而颌下/舌下腺唾液 组和纯化的MG1组能明显抑制脱矿作用，其最大保护百分度分别为96.2%和84.5%。结 论：唾液获得性膜中的MG1可有效地保护牙釉质抵御有机酸对牙面的短暂脱矿作用 。

［关键词］　高分子量唾液粘蛋白； 唾液获得性膜； 牙釉质； 脱矿

　　人类高分子唾液粘蛋白(MG1)是唾液中具有保护作用的蛋白质之一，具有多重的生物学功能 ，是人类口腔环境中非特异性免疫防御系统的重要组成部分［1］。MG1对牙釉质表 面的选择性吸附，使其成为获得性膜的组成部分［2～3］。一方面唾液薄膜作为细 菌在牙面定植的先决条件，具有破坏作用［4］；另一方面作为一道物理渗透屏障， 可保护牙釉质免受环境的损伤和干燥。前者的研究较多，后者国内尚未见报道。Zahradnik ［5～6］研究证明获得性膜具有明显的抗釉质酸蚀作用，但获得性膜的成份复杂，是 何种成份对抗釉质脱矿起主要作用尚不明确。本实验旨在采用不同唾液腺分泌的唾液和纯化 的MG1包被离体实验牙釉质面以形成不同种的唾液薄膜，观察其是否具有抗釉质酸蚀脱矿作 用。

材料和方法

　　一、高分子量唾液粘蛋白提取和纯化

　　1. MG1的提纯：采用Baig［7］的方法。收集健康成人的颌下/舌下腺唾液，加入10% 十六烷基三甲基 溴化铵(CETAB)沉淀MG1。加入羧甲基葡聚糖凝胶进行离子交换，溶液离心，取上清液对去离 子水反复透析，冻干即得MG1粗提。Sephadex G-200凝胶层析得到纯化的MG1。

　　2. MG1溶液的配制：将纯化的MG1以0.16mg/ml溶于107mmol/L Nacl溶液中，加入Cacl2、KH2PO4，使Ca2+Po3-4离子终浓度分别为1.67mmol/L、1.0mmol/L，0.1mol/L NaoH调节pH值至7.0。

　　二、唾液的收集和处理

　　收集对象是无牙周疾患和全身系统性疾病的健康成人。

　　1. 全唾液收集：采用吐出法收集非刺激性唾液，弃去第一口唾液。

　　2. 腮腺唾液收集：应用Carlson-crittenden装置收集刺激性腮腺唾液，弃第一分钟收集液 。

　　3. 颌下/舌下腺唾液的收集：采用颌下/舌下腺唾液收集器收集非刺激性唾液，弃第一分 钟收集液。

　　所有的唾液收集后立即置冰浴试管中。4℃离心(4，000g×15min)，取上清液，60℃恒温浴1 0min, 0.1mol/L NaoH调节pH值至7.0加入终浓度为0.02%的叠氮钠。

　　三、实验牙的处理

　　选用因牙周病或正畸减数拔除的无龋和无氟斑牙的人切牙和双尖牙为实验牙。将牙齿刷洗干 净，除去牙体表面污物，结石。超声波处理20min，在体视显微镜下选择无白斑、裂痕和缺 隙，切除牙根。实验牙釉质面打磨出直径5mm的平面，抛光，共制备20个实验牙面标本，随 机分四组，每组5颗牙。

　　四、唾液获得性膜的形成

　　将指甲油覆盖于实验牙釉质平面的颈1/2，见图1A。将每组的5个标本分别置于全唾液、腮腺 唾液、颌下/舌下腺唾液及MG1溶液四个实验组中。置恒温(37℃)摇床中孵育，作用时间分别 为1/4h、1h、24h、72h、144h。经孵育后在釉质平面的切()1/2形成唾液薄膜。

　　五、酸蚀处理

　　将牙釉质平面的水平中线至颈方1.5mm以内区域的指甲油覆盖物去除(见图1Bb区)，再将此中 线至切端(向)1.5mm以外区域的牙釉质面用指甲油覆盖(见图1Ba区)。标本置于1%枸橼酸(p H2.16)溶液中处理5min，去除两端的指甲油覆盖物。

图1　体外唾液获得性膜的形成(A)和枸橼酸处理(B)，阴影部分是指甲油覆 盖部分，a区为有唾液获得性膜区，b区为无唾液获得性膜区。

　　六、Talysurf-4轮廓仪的检测

　　实验牙标本固定于轮廓仪的载物台上，调整实验牙面至水平位置，触针(探头)纵向扫描实验 釉质平面，横向放大2000倍，纵向放大100倍，触针依次通过实验釉质平面的正常釉质区→ 无唾液薄膜区→有唾液薄膜区→正常釉质区，并将测得的轮廓形态描绘于记录纸上。