内毒素脂多糖等方法刺激大鼠牙髓的组织病理学反应

　　摘要　　目的：采用单纯开放和LPS诱导等方法建立大鼠磨牙实验性牙髓炎模型，并对它们进行比较和评价。方法：充分利用大鼠磨牙，采用单纯开放法和LPS涂布大鼠磨牙牙髓的方法，分别观察牙髓在几种不同刺激条件下的组织病理学反应。结果：几种方法均能成功地造成牙髓炎症，同一时间LPS开放组炎症最重，进展最快，在1周内各组炎症随时间的推移不断发展。结论：单纯开放和LPS诱导均能成功地建立大鼠牙髓炎模型，联合运用可在较短的时间内造成牙髓炎症，提示应该根据不同的实验目的和需求选用不同的建模方法。

关于大鼠磨牙实验性牙髓炎动物模型的建立，国内外学者较多采用的方法是单纯穿髓开放法和内毒素脂多糖（LPS）诱导法。尽管两者均能满足各自的实验需求，但前者影响因素颇多，而后者则因LPS来源、使用浓度等不同而差异较大。本研究通过几种方法的比较为研究细胞凋亡在实验性牙髓炎中的作用奠定基础。

1　材料和方法

1.1　实验动物和主要试剂

上海产SD大鼠16只，雄性，体重200～220g（购自本校动物中心）。

　　LPS溶液：12×106U/L, 中国药品生物制品鉴定所。用生理盐水将其稀释至5g/L，过滤除菌备用。

1.2　方法

根据不同的处死时间将16只大鼠随机分为4组，每组4只，即1d组、3d组、5d组和7d组。846液（0.25ml/kg）肌注麻醉后仰卧固定，以750ml/L乙醇消毒双侧上下颌磨牙区，在双侧上颌第一、第二磨牙面和双侧下颌第一磨牙面轻轻开髓，暴露穿髓点，B区和D区牙的穿髓点稍作扩大。A区第一、第二磨牙穿髓点处置饱蘸LPS溶液的小棉球，B区第一磨牙置相同大小的生理盐水棉球，第二磨牙开放，4个牙同时作用30min后，去除棉球，用无菌棉球擦干牙面，玻璃离子水门汀暂封。C区第一磨牙穿髓后立即置饱蘸LPS溶液的小棉球开放；D区同名牙则置相同大小的生理盐水棉球开放。各组鼠分别于1、3、5、7d后麻醉下放血处死，40g/L多聚甲醛固定液心内灌注30min，切取双侧磨牙区再固定12h，尔后经甲酸-甲酸钠溶液脱钙1周，系列乙醇脱水，二甲苯置换至石蜡包埋。各标本作3μm厚的石蜡切片，HE染色，光镜观察。

2　结果

2.1　处理1d（图1）

A区LPS组镜下可见穿髓点下方呈现以中性粒细胞浸润为主的急性浆液性炎症反应，局部充血，成牙本质细胞层紊乱、变性，部分牙髓变性坏死，根髓基本正常。B区生理盐水组和空白对照组与LPS组病理像基本相同。

图1　LPS处理1d，牙髓呈急性浆液性炎症反应(10×10)

　　C区LPS开放组和D区单纯开放组的病理像也与之相似，表现为急性浆液性炎症反应。

2.2　处理3d（图2）

A区LPS组出现以穿髓点为中心的坏死区，周围有大量粒细胞和部分单核-巨噬细胞浸润，偶见淋巴细胞。炎细胞浸润区周围可见少量纤维组织包饶，成纤维细胞增生，部分细胞呈环状排列。根髓小血管明显扩张，但成牙本质细胞排列基本正常，无炎细胞浸润。B区生理盐水组和空白对照组与LPS组病理像基本相同。

图2　开放3d，大量炎细胞浸润　(10×10)

　　C区LPS开放组和D区单纯开放组的病理像也与之相似，只是LPS开放组炎症较重，表现在坏死区范围广泛，大量炎细胞浸润且聚集成团，根髓血管扩张明显，炎细胞浸润区和充血反应区之间无明显分界，偶见少量成纤维细胞增生。

2.3　处理5d（图3）

4个区处理牙的炎症反应加重，表现在冠髓部分坏死，有的有微脓肿形成；冠髓内大量弥散性炎细胞浸润，以粒细胞、多核巨细胞为主，可见少量的淋巴细胞；根管口附近可见纤维组织包饶炎细胞浸润区，成纤维细胞呈环状排列；根髓血管扩张，成牙本质细胞排列紊乱。此时4个区中C区LPS开放组炎症最重，D区单纯开放组和A区LPS组的组织病理像相近，B区生理盐水组和空白对照组的炎症最轻。

图3　LPS开放5d，冠髓部分坏死, 根髓炎症　(10×10)

2.4　处理7d（图4）