口腔粘膜上皮异常增生和鳞癌组织中凋亡蛋白Bax的表达研究

　　【摘要】　目的　研究凋亡相关蛋白Bax在口腔正常粘膜、上皮异常增生和鳞癌组织中表达及意义。方法　采用免疫组化方法检测10例正常粘膜、10例单纯性增生上皮、32例异常增生上皮、19例高分化鳞癌、9例低分化鳞癌石蜡包埋样本中Bax的表达。结果　正常粘膜中见Bax弱表达局限于角化层。上皮单纯增生时Bax表达较正常组增强，轻度异常增生时反而较单纯增生下降，随异常增生程度加重，Bax明显增加。癌变时Bax表达较重度异常增生下调，且高分化鳞癌Bax表达明显高于低分化鳞癌。结论　Bax蛋白表达水平代偿性增高是口腔癌前病损发生发展中的早期事件。Bax表达下调将导致癌细胞过度积留产生癌变并与其预后相关。

　　【关键词】　上皮异常增生　　鳞癌　　Bax

　　许多证据表明细胞凋亡的调节异常与某些肿瘤的发生相关，凋亡调控基因已被看作一类新的肿瘤相关基因［1，2，3］。鳞癌是口腔中最常见的恶性肿瘤，约占口腔肿瘤的90%以上，且5年生存率不足50%，而口腔粘膜上皮异常增生做为癌前病变约有4%～16%的癌变率［4，5］，所以对其发生演变的病因学研究尤为重要。本文采用免疫组化方法研究凋亡基因产物Bax抗原在口腔正常粘膜、单纯增生上皮、口腔异常增生上皮和口腔癌组织中的表达，以期探讨它与口腔癌前病变、鳞癌的发生发展的关系。

材料和方法

　　1.标本：选择1995年～1998年北京医科大学附属口腔医院病理室保存资料完整的石蜡包埋组织80例，其中正常口腔粘膜10例、单纯上皮异常增生10例、上皮轻度异常增生11例、中度异常增生13例、重度异常增生8例、高分化鳞癌19例、低分化鳞癌9例。

　　2.试剂：兔抗人Bax多克隆抗体、SP试剂盒均为Santa Cruz公司产品。

　　3.免疫组化染色方法：切取5μm厚石蜡切片常规脱蜡水化后，用39%H2O2甲醇溶液抑制内源性过氧化物酶后，置于柠檬酸缓冲液(pH6.0)中水浴微波处理进行抗原修复。再用10%正常绵羊血清封闭10分钟，Bax抗体稀释度为1：80，生物素化二抗体为1：150，链条和素为1：150，采用SP法染色，显色底物为DAB。每次实验均用已知阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗为阴性对照。

　　4.判断标准：Bax阳性反应为黄到棕黄色颗粒，定位于胞浆，根据Nakagawa等提供的方法，高倍镜下进行计数：标本中无阳性细胞为0分，＜25%为1分，26%～50%为2分，50%以上为3分，染色强度以淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两者相乘，0分为阴性(-)；1～3分为弱阳性(+)；4～6分为中等阳性(++)；7～9分为强阳性(+++)。

结　　果

　　10例正常口腔粘膜有7例出现Bax阳性表达，表达程度较均一，为弱阳性表达，主要局限于角化层浅表细胞，而在上皮单纯增生的10例标本中可见Bax阳性表达的细胞数和强度均较正常粘膜明显增加，但仍以颗粒层和棘细胞浅层细胞着色最深，中等强度以上阳性率为60%。随着上皮异常增生的出现，Bax表达总的阳性率虽然没有明显的改变(单纯增生和轻度异常增生相比，P＞0.05)，但阳性细胞数和着色程度却明显下调，中等程度以上阳性率下降为33.3%。当上皮出现中度和重度异常增生时，Bax表达较轻度异常增生时再次呈现增强趋势(图1)，中等程度以上阳性率上升到76.7%和87.5%。

　　在鳞癌组织中，19例高分化鳞癌中出现中等程度以上阳性染色13例(占68.4%)，阳性细胞弥漫分布于肿瘤全层，且在分化较好的癌巢中央细胞多为Bax强着色，而癌巢周边的细胞则着色较淡(图2)，这个结果与Jordon等［6］的观察相一致。各级上皮异常增生粘膜和鳞癌组织Bax的表达情况见表1。单纯增生与轻度异常增生无显著性差异P＞0.05；单纯增生与正常粘膜、重度异常增生与高分比化癌、高分化鳞癌与低分化鳞癌均有显著性差异P＜0.05。

表1　口腔正常粘膜、上皮单纯增生、异常增生和鳞癌组织中Bax的表达比较

 组别例数-++++++正常粘膜

10

37

　0

0单纯增生100442轻度异增110731中度异增131264重度异增80107高分化鳞癌1915103低分化鳞癌97110