口腔粘膜癌变过程中细胞角蛋白CK10和CK13的变化
〔摘要〕 目的：探讨细胞角蛋白CK10和CK13在口腔粘膜癌变过程的各阶段组织中的分布和表达强度。方法：用LSAB免疫组化染色方法对口腔正常粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和口腔磷癌切片进行染色，光镜观察。结果：正常颊粘膜和口底舌腹粘膜基底上层CK10表达阴性，CK13表达强阳性；上皮过度不全角化时，CK10表达可为阳性 ，CK13表达减少；上皮过度正角化时，CK10在基底上层呈强阳性表达，CK13表达进一步减少甚至缺失。随上皮异常增生程度加重，基底上层细胞CK10和CK13表达减少甚至缺失。在口腔浸润癌中，不管分化程度如何，CK13均表达阴性，而CK10在分化较好的癌细胞及癌巢中呈阳性表达。结论：CK13表达减少或缺失可作为口腔癌前病变诊断的辅助指标，CK10可为口腔癌的分化程度及其预后判定提供帮助。
关键词 口腔；癌前状态；角蛋白细胞角蛋白(cytokeratin ,CK)是中间丝蛋白的主要组成成分，主要表达于上皮细胞，随细胞类型和分化程度不同而表达类型有差异。CK由多基因家族编码。根据其相对分子质量(Mr)和等电点不同分为两型〔1〕，I型为酸性，Mr为40 000～64 000，包括编号9～20(CK9～CK20)角蛋白多肽，Ⅱ型为中性或碱性，Mr为52 000～68 000，包括编号1～8(CK1～CK8)的角蛋白多肽。通常CK在上皮中以“角蛋白对”的形式表达，“角蛋白对”由一个I型角蛋白分子和比其大Mr 8 000的Ⅱ型角蛋白分子构成。CK具有高度的细胞和组织特异性。通常复层上皮的基底层表达CK5/CK14，角化上皮的基底上层表达CK1/CK10，非角化上皮的基底上层表达CK4/CK13。细胞角蛋白在上皮细胞中含量丰富且稳定，因而如能作为口腔癌前病变和口腔癌的标志将具有优越性。本研究的目的是检测CK10和CK13在从正常粘膜到口腔癌的各阶段组织中的变化，以探讨细胞角蛋白作为口腔癌前病变标志的可能性。
1 材料和方法
1.1 标本来源 正常粘膜来自尸检。病变粘膜来自半年内全身或局部未用过激素类或维甲酸类药物的门诊患者，局麻下活检， 组织经体积分数为10%的中性福尔马林液固定，石蜡包埋，5 μm连续切片用于HE染色作病理诊断和免疫组化染色。
1.2 试剂 鼠抗人CK10单克隆抗体(DE-K10)，鼠抗人CK13单克隆抗体(DE-K13)，均为ZYMED公司产品，购自福州迈新公司。LSAB试剂盒、DAB为DAKO公司产品。
1.3 免疫组化方法 CK10抗体采用不预处理的LSAB法，用正常牙龈组织作阳性对照；CK13抗体采用胰酶处理的LSAB法，用无角化的颊粘膜作阳性对照，二者均采用PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 结果的分析方法 HE切片的诊断由两位有经验的病理医生盲法读片确认。免疫组化结果采用半定量法判定：-阴性，±阳性细胞占基底上层的25%以下，+阳性细胞占基底上层的25%～50%,++阳性细胞占基底上层的50%～75%，+++阳性细胞占基底上层的75%以上。结果采用秩和检验分析。2 结 果
2.1 临床病理资料 研究对象的临床病理资料见表1。表1 研究对象的临床病理资料
病理诊断例数平均年龄部位颊舌背舌腹口底龈正常粘膜13455422上皮单纯增生无过度角化13555521有过度角化18507731轻度上皮异常增生18518352中度上皮异常增生16529610重度上皮异常增生15536360浸润癌144851712.2 免疫组化染色结果 CK10和CK13为终末分化标志，不表达于基底层细胞，而分别表达于不同分化类型上皮基底上层细胞的胞浆中
正常粘膜：正常颊粘膜和口底舌腹粘膜为无角化上皮，CK10表达阴性，而基底上层CK13表达阳性(+++)；舌背粘膜为不全角化上皮，基底上层CK10表达(+)；牙龈粘膜为角化上皮，基底上层CK10表达(+++)，舌背和牙龈基底上层CK13表达(+)