幽门螺旋杆菌在口腔扁平苔藓发病中的意义
提 要 为了探索口腔扁平苔藓（OLP）与系统疾病的关系，本研究以系统因素中的消化系统为背景，应用PCR技术对90例OLP患者进行了幽门螺旋杆菌（HP）检测。结果显示：在90例OLP患者中，其中60例表现为口腔粘膜损害区HP阳性，与正常组相比具有高度显著性差异（P＜0．01）；对其中45例OLP患者作胃镜检查并进行病变区胃粘膜的HP检测，发现45例OLP患者均患有不同程度与类型的慢性胃炎，且HP检出率与正常对照组相比亦具有高度显著性差异（P＜0.01）。说明OLP与慢性胃炎可能具有相似的发病机制,同时，HP很可能是OLP的直接致病菌。
关键词 口腔扁平苔藓 聚合酶链反应 幽门螺旋杆菌实验证明各型慢性胃炎的致病菌是幽门螺旋杆菌（Helicobacter Pylori,简称HP）［1］，提示HP与OLP具有某种内在联系。为此，我们应用聚合酶链反应（PCR），对OLP与HP的关系进行了研究与探索，以期阐明OLP的可能发病机制,同时明确皮肤—粘膜损害在本质上有否差异。
材料与方法
1. 病例选择
选取在我科就诊且资料最完整的OLP患者共90例，其中，男性34例，女性56例，男女比例为0.6∶1；年龄最小8岁，最大75岁，平均年龄43.4岁；病程最短1周，最长10年，平均病程1.8年。所有OLP患者的选择均符合如下条件：①7天内未服用抗生素、铋制剂、抗酸制剂或H2受体拮抗剂；②30天内未服用类固醇药物及非类固醇类抗炎药，如阿斯匹林等。另取30例皮肤扁平苔藓（取自于皮肤科且无口腔损害）作对照研究，选择条件同上。
2. 方法
2.1 所有病例均作口腔粘膜白纹区活检与活检标本分切，分别作HE染色和HP-PCR检测。其中45例OLP患者同时作胃镜检查，其胃粘膜活检标本及30例皮肤LP活检标本均作同样检测。
2.2 HP-PCR检测［2］
2.2.1 试剂：HP-PCR检测试剂盒购自上海复华实业股份有限公司生物技术中心。
2.2.2 标本处理
取新鲜活检口腔粘膜及胃粘膜标本，各加入100μl裂解液，混匀，然后加入4μl蛋白酶K，50℃水浴1h，取出后再沸水浴5min，最后离心（15000rpm/min,10min),取10μl做反应。
2.2.3 操作步骤：
先将DNA聚合酶与灭菌双蒸水按1∶3稀释，混匀，4℃贮存备用。①按顺序在50μl无菌塑料离心管中加入：a.18μl反应液；b.20μl稀释后的DNA聚合酶；c.10μl标本处理液或阳性对照（阴性对照加10μl灭菌双蒸水）。②摇匀后加入20μl液体石蜡，短时离心。③置93℃保温4min。④按下列步骤：a.93℃ 30s→b.50℃ 30s→c.70℃ 60s循环35次。⑤最后置72℃5min。
2.2.4 电泳鉴定：（扩增片段430bp)
取10μl扩增产物与1μl溴酚蓝混匀，用2％琼脂糖凝胶（含0.5％的溴乙锭）经TAE电泳30min（电压5v/cm），用紫外透射仪检查，若标本扩增带与阳性扩增带处同一位置，可判断标本为阳性，反之为阴性。
2.3 对照的设定
取30例皮肤OLP作对照研究，取50例正常口腔粘膜（25例颊粘膜、25例牙龈）与45例胃镜普查的正常胃粘膜作正常对照。结 果
1. OLP与慢性胃炎的关系
在90例OLP患者中，45例经胃镜检查。内镜诊断参照1986年全国统一对慢性胃炎的分型标准［3］。在45例中，慢性浅表性胃炎27例，其中伴肠上皮化生5例，属活动性胃炎3例；慢性萎缩性胃炎8例，其中伴上皮化生2例，伴十二指肠球炎1例；慢性浅表萎缩性胃炎10例，其中属活动期胃炎1例，伴上皮化生及处活动期胃炎者1例。经胃镜检查的45例OLP中，均患有不同程度的胃炎，发病率为100％。
2. 90例OLP患者的HP-PCR检测结果（表1）。表1 口腔粘膜HP-PCR检测结果
表6中数据表明，在OLP患者的慢性胃炎的胃粘膜组织 ，HP-PCR的检出率明显高于正常胃粘膜对照组，经Fisher确切概率法检验，具有高度显著性差异,说明慢性胃炎的发生与HP的感染具有密切关系。
