幽门螺杆菌在牙菌斑中的分布研究
摘要目的：为探讨幽门螺杆菌(HP)在口腔内的分布及感染方式，本实验对不同程度牙周炎患者46例，对照组20例进行了龈上及龈下菌斑研究。方法：采用PCR技术，提取HP的染色体DNA，对其特异性片段进行诊断。结果：
牙周炎组HP阳性率平均39.1%，健康对照组15%，重症牙周炎组阳性率52.3%，显示了HP在口腔分布与年龄、牙位、牙周炎的程度密切相关。结论：牙菌斑是HP孳生地，口腔环境可能是HP一条传播通道，有关HP对牙周组织损害的研究尚待深入。
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)是一种微需氧、革兰氏阴性螺旋形细菌，与慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌等消化系统疾病的发病关系密切。虽然关于HP的流行病学研究较多，但其传播途径目前仍然不甚了解。国外某些学者近期发现HP也存在于牙菌斑中，提示口腔环境可能是一条HP的传播通道。口腔微生物的种类及数量非常庞大，在深牙周袋及根管内存在大量革兰氏阴性厌氧杆菌，可动菌，但培养及鉴定较为困难。本研究选择克隆的HP染色体DNA特异片段，通过获得极少量细菌DNA的方法，运用PCR技术研究幽门螺杆菌在口腔菌斑中的分布，探讨HP与牙周病的相互关系，旨在为幽门螺杆菌传播方式及流行病学研究提供有关数据。
1 材料和方法
1.1 选择对象
实验组：中国医科大学口腔医院牙周科门诊患者46例，均为成人牙周炎(诊断按照全国统编教材第三版口腔内科学标准)。男25例，女21例，平均年龄39.8岁。牙位选择为每一患者仅取一个牙齿的一个牙面菌斑，前牙8个，前磨牙13个，磨牙25个。所有患者在检查前2个月均未服用抗生素，去除龈上菌斑，取龈下菌斑，对于牙龈指数为3以上者，同时留取龈上菌斑，置入装有无菌生理盐水的尖底离心管，-40℃保存备检。
对照组：选择口腔卫生状况良好，无牙周疾病者20例，男11例，女9例，平均年龄35.3岁，前牙3个，前磨牙5个，磨牙12个，与实验组同样取龈下菌斑备检。
1.2 标本处理
将备检的牙菌斑放入400μl无菌生理盐水中12?000r/min×5min，弃上清，加入DNA裂解液50μl，蛋白酶K 2μl，对于大块牙石或组织可用枪头研磨，磨碎为止，55℃水浴1h，100℃沸水中置10min，同时设置阳性模板和阴性对照(由伊利康公司提供试剂盒)，15?000r/min×5min，取5μl进行PCR。
1.3 PCR检测
取扩增产物15μl，用15g/L琼脂糖凝胶(含0.5g/L溴化乙锭)经TAE电泳缓冲液，电泳30min(电压5V/cm)在紫外透射反射仪300nm下观察结果，若在200bp处出现橙黄色条带，则诊断为HP阳性。
2 结果
2.1牙周正常部位，GI为零的龈下菌斑中，HP阳性率15%，牙周病组平均检出率39.1%，重症牙周病组，GI为3以上者，HP检出阳性率52.3%，两者与对照组比较P<0.05，有显著差异(表1)。
表1 不同程度牙周病变HP的检出率
牙龈指数(GI) 总例数 阳性例数 阳性率(%) 平均阳性率(%)020 3 15.0 18225.02175 29.4* 39.1* 32111 52.3* * P<0.05
2.2 牙龈指数为3以上者，同一牙面取龈上及龈下菌斑显示龈上、龈下各为两个区域，龈下菌斑中HP阳性者多(表2)。
表2 重症牙周炎同一牙位龈上、龈下菌斑HP检出比较
患者编号性别年龄牙位龈上菌斑龈下菌斑
1M6127-+2M5826++3F6212++4F6036-+5M4714-+6F4026-+7M4016++8F4227-+9M5217++10M5825-+11M5511-+2.3对于牙龈指数为3以上者，对其牙位及不同年龄进行了比较，显示磨牙区HP阳性者较其他牙位检出率高，组间比较有显著差异，在年龄上HP阳性者多见于中老年牙周炎患者(表3，4)。
