放线共生放线杆菌的分型和基因鉴定方法

　　放线共生放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa) 是革兰氏阴性、兼性厌氧的球杆菌，它在牙周炎患者的牙周袋中检出率较高，有报告 90%‘以上青少年牙周炎的牙周损害部位有此菌定居［1］，因此， 被认为是与牙周炎，尤其是青少年牙周炎的发生紧密相关的口腔致病菌。但不同病种Aa的类型并不完全相同，说明其致病力存在差别，以下就Aa的几种分型方法和与临床牙周状况间关系加以综述。

1　生物型（biotype）

　　细菌的生物型是根据其生化反应的不同划分的。Aa的生化特征并不十分一致，其共性特征为：发酵果糖、葡萄糖、不溶血、吲哚反应阴性、产生过氧化氢酶、生长不需要X和V因子，以此与其它菌种相区别。但根据对碳水化合物的发酵，尤其是对糊精、半乳糖、麦芽糖、甘露醇和木糖的发酵能力不同，又将Aa分成10个生物型［1］。由于对Aa生物型的确定费时、复杂、工作量大，现在应用较少。 据研究发现，同一个体口腔内不同牙位分离的Aa基本上为同一生物型，在同一家庭不同成员中分离到的Aa菌也常为同一生物型［1］。

2　血清型（serotype）

　　细菌的血清型是以菌种抗原结构的差别来划分的，抗原结构不同，则宿主产生的抗体也不同。Aa血清型的研究包括以下几方面：血清型的种类，临床分离菌的血清型鉴定，血清型菌落在不同牙周状况中的分布，血清型抗原的成分等。

　　关于Aa血清型的种类,公认的有三种:血清型a、b、c［2］,近年,两种新的血清型d和e又分别被发现［3］，同时，少数临床分离菌由于没有抗原性,无法确定其类型，将之称为未确定型(untype)［3］。因此，Aa 菌的血清型分类现在认为至少有5种，至于未确定型，仍有待研究。而且最初的研究认为同一受试者只含一种血清型，目前多数人则认为同一个体可含两种血清型，但这种情况所占比例较少。

　　Aa菌血清型与临床牙周状况的关系目前仍有争议，国外的报告大多认为血清型b株在牙周炎患者中检出率较高,尤其是青少年牙周炎患者血清型b 株的发生率是a、c两型的2倍,说明b型为高毒力株。 但国内的研究则显示青少年牙周炎患者的分离菌以c型为主［4］,因此,究竟哪种血清型为主要致病菌,哪型细菌毒力更强,仍难以确定,这可能与种族、性别、年龄、地理等因素有关。至于Aa 血清型的稳定性，一些研究［3］证明可保持不变，追踪数年其血清型仍保持其稳定性， 即使治疗也不能使其发生改变。

　　对血清型的研究在血清型抗原的组成方面较多，而微生物抗原结构和功能的研究则对于确定细菌表面成分、相应的毒力因子，阐明宿主对感染因子的免疫反应都十分有用。Aa血清型抗原是耐热、高分子量、位于细菌表面的碳水化合物。血清型a抗原在不同患者其变异较大，可能是Aa的共同抗原［5］。血清型c 抗原是含大量甘露糖的多糖［5］，是Aa荚膜的一部分。由于多数研究结果认为血清型b株与牙周支持组织的破坏有关［2］，因此对血清型b抗原的结构研究较多，多数研究报告［6］血清型b抗原位于内毒素脂多糖(LPS)的多糖部分，但McArthur［7］的结果则完全相反，认为血清型b抗原是与LPS无关的多糖，是由细胞膜伸出的无定型物质。因此，三种血清型抗原的成分仍存在分歧。另外，由于所采用的研究方法不同，所确定的抗原成分也不同，液体培养基的上清液中分离的血清型a、b、c 抗原是含大量甘露糖的多糖，而用高温灭菌法和超声处理所得血清型b 抗原则不含甘露糖［6］。由于血清型d、e株Aa菌发现较晚［3］，因此，对这两种菌株血清型特异性抗原研究较少，Yamamoto［8］用高温灭菌法报告血清型d抗原主要由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖组成，而血清型e抗原还含有半乳糖和无法确定的糖。

　　从以上血清型特异性抗原成分的分析可见：由于成分的不同而导致其抗原性的不同，显示了各不相同的致病性及临床表现。因此，需进一步研究基因水平的差别，从而将表型与基因型联系起来。