慢性成人牙周炎患者龈沟液谷胱甘肽过氧化物酶的测定
〔摘要〕 目的：证实龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)中谷胱甘肽过 氧化物酶(glutathione peroxida.se,GPx)的存在，初步探讨其与牙周病的关系。[ HT5”H 方法：选择12名牙周健康者(H组)的21个牙位点及23名慢性成人牙周炎 患者(AP组)44个牙位点用DTNB显色法测定GCF-GPx活性，并记录AP组GI、PD、AL。结果：AP组GCF-GPx活性〔(160.07±121.44)U〕明显低于H组(503.35±304. 36)(P<0.001)，AP组GPx活性与PD、AL负相关(r=-0.3058,P<0.05 r=-0.42 92，P<0.05)。结论：GCF-GPx的存在间接提示：牙周炎可能是 局部自由基产生清除失衡的结果，牙周局部存在着抗氧化能力的下降。
关键词 牙周炎；龈沟液；谷胱甘肽过氧化物酶；自由基牙周炎发病因素复杂，现多认为是细菌感染性疾病，牙周致病菌激发的过度的宿主反应 ，尤其是炎症反应，是牙周组织破坏的主要原因〔1〕。与身体其它部位炎症类似 ，局部浸润的炎症细胞在“呼吸爆发”(respiratory burst)过程中将产生大量的氧化产物 〔2〕。自由基(FR)在杀灭微生物的同时，也破坏正常的组织细胞结构。机体内有多 种天然的FR清除剂，正常情况下FR的产生和清除处于动态平衡，一旦平衡关系打破，即可导 致病理状态。FR已被证实为多种疾病的致病因子，如炎症、肿瘤、衰老等。
龈沟液(gingival crevicular fluid，GCF)中已检测出多种宿主反应产物。本研究即首次证 实了GCF中FR清除剂-谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)的存在，比较了慢性 成人牙周炎组与牙周健康组GCF-GPx活性的差异，分析了该酶的活性与牙周临床指标的相关 性，以初步探讨其与牙周炎的关系。1 材料和方法
1.1 对象
临床确诊为慢性成人牙周炎(AP)组23人(男13人，女10人)，年龄31～63岁，平均年龄43.8岁 ，皆来自华西医科大学口腔医院牙周病诊室初诊患者，选取44个患牙，记录临床指标，收集 GCF样本。牙周健康组(H)组12人(男7人，女5人)，年龄31～62岁，平均年龄42.8岁，皆为本 院学生或教职工，选取21个受检牙。以上纳入研究者，无全身系统疾患，3月内未使用过抗 生素及其它影响FR的药物，半年内无牙周治疗史，妇女未妊娠。
1.2 方法
1.2.1 GCF样本的采集与处理 隔湿取样牙，去除龈上菌斑，将专用滤纸条(Periopaper)放 大该牙颊侧近中的牙周袋或龈沟内，留置30 s后取出(若滤纸条上有血则弃去，重新选牙)。 10 s后在同一位点再次取样，用龈沟液测量仪(periotron 8000)测得液量后立即将两张滤纸 条一同放入盛有200 μl生理盐水的EP管中(龈沟液的总量为两次之和)，置于-20°冰箱内 保存待用。1月内成批取出，室温下解冻，漩涡振荡器上振荡洗涤，10 000 r/min离心，10 min后取出上清液，测定酶活性。
1.2.2 记录牙周临床指标 为防止对GCF质和量的影响，临床指标的记录均在取样后进行。记录如下指标：牙龈指数(GI )、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)。
1.2.3 GCF-GPx的测定 参照夏奕明等〔3〕的DTNB直接法，在自动微板读数仪上测定GCF-GPx活性。
原理：
GPx活力以催化GSH氧化的反 应速度即单位时间内GSH减少的量来表示。GSH和5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(缩写DTNB )反应，在GPx催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，测定该离子的浓度，即可计 算出GSH减少的量。由于GSH在没有酶的条件下也能进行氧化(非酶反应)，所以最后计算酶的 活性时，必须扣除非酶反应引起的GSH的减少量。
单位定义：每微升GCF在37°反应5 min，扣除非酶反应，使GSH浓度降低1 μmol为1个酶活 单位(U)。
1.2.4 试剂和操作步骤(略)2 结 果
2.1 AP组GCF-GPx活性明显低于H组(P<0.001)(表1)。
表1 H组与CAP组GCF-GPx活性(U)
