变形链球菌耐氟菌株脱矿能力的体外研究
摘 要：目的：探讨变形链球菌耐氟突变后，其致釉质片脱矿能力的改变。方法：采用原子吸收分光光度计，测定不同氟浓度条件下变形链球菌耐氟菌株培养物上清液中钙离子浓度，并与亲代菌株进行比较。结果：耐氟菌株脱矿量在无氟化物存在时，小于亲代菌株；而当0.5mmol/L氟离子存在情况下，其脱矿量大于亲代菌株。差异具显著性。结论：耐氟菌株的产生将增加变形链球菌的致龋力。
变形链球菌(以下简称变链菌)为人类龋齿主要致病菌，其高致龋力与自身具有很强的产酸力和脱矿力有关。局部高浓度氟化物的广泛应用可导致变链菌耐氟菌株的产生。国外学者已在体内及体外获得变链菌耐氟菌株，并对其致龋毒力进行研究［1，2］。为探讨国人变链菌耐氟菌株脱矿能力的改变，本实验在体外通过测定变链菌耐氟菌株及亲代菌株致釉质脱矿量，以推测其致龋能力的改变。
1 材料和方法
1.1 细菌和培养基
变链菌亲代野生菌株为国际参考株S.mutans Ingbritt和本实验室临床分离株SSMU-M1；耐氟菌株为上述亲代菌株体外经逐步诱导法获得［3］，分别命名为Ingbritt-FR和M1-FR。
培养基为含40g/L葡萄糖的乳酪消化大豆胨肉汤TSB。
1.2 菌悬液及培养基配制
按常规将4种待测菌株活化后，于TSB培养基中37℃微需氧培养18h。离心收集细菌。生理盐水调吸光度ABS为1.0，备用。
在含40g/L葡萄糖TSB培养基中加入20g/L NaF液使终度分别为0、0.05和0.5mmol/L，用以细菌脱矿实验。
1.3 釉质片的制作
选择临床上因正畸需要而拔除的上颌前磨牙，体视显微镜下观察无龋，无裂痕，无斑釉症及四环素牙等疾患。彻底洗刷干净，切去牙根，取冠部釉质冷水冲洗下磨制成4mm×4mm×1mm大小釉质片，超声清洗5min，750ml/L乙醇消毒72h，备用。
1.4 细菌脱矿实验
将消毒好的釉质片用无菌生理盐水冲洗3次后，置于含有不同氟浓度的TSB培养基中，每个试管置4片，再按菌液：培养基为1：10(v/v)比例接种细菌，37℃微需氧培养72h(950ml/L N2，50ml/L CO2)。以不接种细菌但含有釉质片的TSB培养基作阴性对照。
1.5 培养基中钙、磷浓度测定
将含有釉质片的72h细菌培养物，经3?000r/min离心15min，取2ml上清液，用2g/L LaCl3溶液稀释后，在原子吸收分光光度计(VIDEO22型，美国实验仪器公司)上，以灯电流5mA，波长422.7nm，狭缝宽度1.0nm以下，用火焰原子吸收法进行检测。2 结果
各菌株在不同氟离子浓度下对釉质片的脱矿情况(表1)。
表1 变链菌及耐氟菌株在不同氟浓度下的脱矿量 (n=4)
菌株F- mmol/LCa2+mg/LP3+mg/LIngbritt0
158.69±17.39
2.33±0.59
0.0544.10±14.790.93±0.210.58.91±0.820.74±0.04SSMU-M10161.91±19.411.43±0.080.0548.50±20.401.16±0.110.59.80±0.800.99±0.05Ingbritt-FR△080.02±51.07*0.89±0.11*0.0542.73±1.130.88±0.070.515.53±3.20*0.90±0.01*M1-FR△075.65±37.19*1.02±0.08**0.0562.69±36.641.19±0.070.514.76±1.67*1.54±0.36*△表示耐氟菌株； 与亲代菌株相比， *P<0.05，
**P<0.01，有显著性差异
经Student t检验：F=0mmol/L时，亲代菌株Ingbritt和SSMU-M1致釉质脱出的钙、磷离子量多于耐氟菌株Ingbritt-FR 和M1-FR(P<0.05)；F=0.05mmol/L(相当于2mg/L)时，二者脱矿量相近；F=0.5mmol/L时，耐氟菌株脱矿量大于亲代菌株(P<0.05)。临床分离株与国际参考株表现相同(表1)。3 讨论
釉质内含有大量无机物，按重量计算占95%，其中绝大部分为含有磷酸钙的羟基磷灰石晶体。所以，釉质中含有最多的无机组份是钙，其次为磷，钙与磷呈平行分布，且釉质内Ca/P比值保持恒定，一般为1.60±0.08。龋齿是由于菌斑细菌酵解碳水化合物产生酸，酸积累达到一定数量和时间，牙齿中的矿物质发生溶解，钙和磷等无机离子由牙齿中脱出，发生脱矿而开始。
